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为什么要进行色谱柱平衡

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一、为什么需要进行柱平衡?

· 置换色谱柱内储存的溶剂

· 在流动相和固定相之间建立平衡

· 湿润固定相以实现分析物的分配

· 产生可靠的结果。

二、色谱柱没有平衡好会产生何种影响?

·基线波动

·保留时间变化

·峰形变形

·分离度变差

·响应异常

·产生鬼峰。

三、哪些因素影响色谱柱平衡?

- 固定相性质:具有庞大基团或空间位阻的固定相(例如苯基柱)可能需要更长的柱平衡时间。

- 表面积:具有较低表面积的固定相有利于更快的柱平衡。

- 孔径大小:具有较宽孔径(因此表面积较低)的固定相有利于更快的柱平衡。

-流动相组成:具有较高浓度的缓冲盐和离子对试剂的流动相需要更长的平衡时间。

-水相的比例:如果流动相中的水相含量较高,柱平衡时间可能较长。

-柱温:较高的柱温会加速柱平衡,因为分子运动加快(黏度降低)。

-梯度洗脱中的缓冲盐浓度:通过在两个流动相瓶中加入缓冲盐溶液,以保持洗脱过程中缓冲盐浓度的稳定,有助于加快洗脱过程中的柱平衡速度。

注意:在平衡过程的开始阶段应避免使用缓冲盐:有机相,而是使用比例相符的水:有机溶剂,然后再使用初始流动相平衡。

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